差异基因表达的研究 ［转贴］

anxiany

差异基因表达的研究受到了广泛的关注，常用的技术有DD-PCR；GENE-FISHING；GENE
CHIP等。简单介绍如下：

DDRT—PCR技术即mRNA差异显示聚合酶链式反应技术，此技术是以PCR技术和聚丙烯凝胶电泳技术为基础，结合银染或放射性自显影等显色技术，能快速有效地鉴定并克隆两个或多个平行材料之间的差异表达基因。DDRT—PCR技术的基本过程如下：①提取两组平行材料中的总RNA或mRNA；②在逆转录酶作用下，以Oligo
dT12MN为锚定引物将mRNA反转录成cDNA；③ 以cDNA为模板利用10一mer随机引物和锚定引物进行PCR扩增；④
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，结合银染等显色方法获得平行材料间的差异cDNA片段，回收并再扩增差异片段；⑤Northern
blotting检测差异cDNA片段是否为阳性片段；⑥克隆cDNA片段并测序；⑦
根据测序结果筛选cDNA文库或使用RACE技术获得cDNA片段侧翼序列，进而获得其全长cDNA基因。

GeneFishing技术用来检测不同样品间的表达差异。该技术着眼于解决目前用来检测基因表达差异的方法所面临的问题，如芯片技术和差异显示技术。该技术的实验包括以下三个步骤，反转录PCR
(RT) 和两步法PCR (GeneFishing PCR)。第一步:
用dT-ACP1引物合成cDNAs的第一链。dT-ACP1引物的3′端与mRNA的多聚A互补。这样第一链cDNA包含了dT-ACP1引物
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