中和反应技术

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病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
（一）简单定性中和试验
本法主要用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。先根据病毒易感性选定试验动物（或鸡胚、细胞培养）及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度（约100 LD50～1 000LD50或TCID50）。污染的病料需加抗生素（青霉素、链霉素各200～1 000单位），或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清（适当稀释或不稀释）等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素（如肉毒毒素）的鉴定和分型。
（二）固定血清稀释病毒法
本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清（对照组），第二列加待检血清（试验组）。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3～5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数（表7-1、表7-2），本法适用于大量检样的检测。
表7-1 固定血清稀释病毒法术式
查3.3反对数是1.995，故中和指数10 3.3＝1.995。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的1.995倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10～49为可疑，小于10为阴性。

（三）固定病毒稀释血清法

本法用以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液（与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50），摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物（表7-3）。

表7-3 固定病毒稀释血清中和试验(例二) [1]
（四）空斑减少法
在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个～100个PFU（空斑形成单位），与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分别测定PFU，使空斑减少50％血清稀释度即为该血清的中和价。见表7-4。
表7-4 空斑减少法中和试验示例