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[【学科前沿】] 突变植物细胞株的筛选

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发表于 2007-7-9 14:02:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
用各种手段诱变植物细胞,可通过以下手段筛选具有目的性状的细胞株:

小细胞团筛选法
制备得到单细胞,在常规的培养基中经过单细胞培养,形成细胞团,通过观测细胞团的形态、颜色或者测定细胞代谢物的种类和含量,从而选出所需的细胞。
实例:筛选花色苷含量高的玫瑰茄细胞

选择压力筛选法
通过添加某些对不同的细胞有不同作用效果的物质,淘汰部分敏感细胞,而选择得到所需的细胞。
A、正选择:把受选择的细胞群体置于一定的选择压力之下,部分细胞在选择压力的作用下受到淘汰,而有一些耐受抗选择压力的细胞可以生长,从而选择得到所需的细胞。可采用一步或多步选择。
例子:NaCl为选择剂选择耐盐突变体、以除草剂为选择剂选择抗除草剂突变体
B、负选择:选择的对象是在一定选择压力的作用下不能生长的那些细胞,而能够生长的细胞受到淘汰。例子:对营养缺陷型突变体的选择。

a、直接选择:所用的选择压力正是以后在整体植株水平上突变表现型的作用对象。
实例:抗性突变体的选择,用生长抑制剂如抗生素、代谢类似物、某些金属及非金属离子等,来分离培养植物细胞,从中选择对生长抑制剂具有抗性的突变细胞,关键是对生长抑制剂浓度的选择。
b、间接选择:选择压力不是突变表现型对其直接表现抗性的物质。
实例:营养缺陷突变体、温度敏感型突变体及抗旱细胞突变体等的筛选

影响细胞筛选效果的因素
1、亲本材料对筛选效果的影响
2、培养方式对细胞筛选效果的影响
愈伤组织培养:生长速率比较慢;并非所有的细胞都能与培养基直接接触;细胞之间的接触相当紧密;
细胞悬浮培养:以大小不一的细胞团形式存在;释放的有毒物的影响较大;
原生质体培养:分离和培养技术还不完善;
3、细胞生长速度对细胞筛选效果的影响
4、选择压力的施加方式对细胞筛选效果的影响:一次性施加和逐步施加
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