小鼠脾细胞悬液制备

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1 ． 小鼠颈椎脱臼处死， 75% 乙醇浸泡 3 分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；

2 ． 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；

3 ． 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏。放入盛有 5ml Hanks 液的培养皿中；

4 ． A ：梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降 5 分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞；

B ：钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（ 100 或 200 目）上，用注射器针芯轻轻研压脾脏，获细胞悬液；

C ：酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入 400 u/ml 胶原酶（ III 型） 5ml/ 只脾脏， 37 度消化 20 分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。

注：
1 ． 一般 6-8 周龄小鼠，根据品系不同，可得 5-20 × 10 7 细胞 / 只小鼠；

2 ． 手术器械灭菌：术前高压灭菌外，也可将手术器械泡在 95% 酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简便