ELisa 常见问题及经验总结

yujian623

做Elisa经常会遇到问题,一开始不知道怎么办.我想很多人像我一样.下面我谈谈自己在这方面的总结经验:
1 对于新手,经常遇到Elisa板上面全是兰色(假设我们底物是用TMB).即阳性,阴性无差异性.
解析:主要原因:⑴封闭.没有封闭好.可能是时间太短或浓度太小⑵血清.阴性血清浓度大,里面的杂蛋白量就多了,与封闭液反应.然后再与2抗反应,所以阴性结果OD值比较高.还有一个可能就是你的血清稀释的浓度过高引起.⑶二抗  二抗浓度高,使阳性、阴性同时升高⑷操作方法  注意洗涤时一定要洗干净.
2 有时我们还会遇到Elisa板上面没有颜色.
解析:主要原因:⑴封闭液浓度过高 使得封闭液把所有位点全部占用.阻止了血清与包被液的结合.⑵二抗  有可能是二抗长时间放置,效价降低.你做实验时还是按照你以前的浓度计算的结果.