用ＴＲＯＺＯＬ试剂提取组织细胞总ＲＮＡ过程

yujian623

实验步骤
一．  约１００mg肿瘤组织加１ml的ＴＲＯＺＯＬ试剂，匀浆器（冰上操作）匀浆后倒入原离心管内。
二．  总RNA提取：
1.  加入0.2ml/0.16ml氯仿，振荡15s（用力）,静置2min
2.  4°C离心，12000gⅹ15min，取上清。（1.5ml离心管）
3.  加入0.5ml异丙醇，将管内液体轻轻混匀，室温静置10min。（尽量时间长些）
4.  4°C离心，12000gⅹ10min，弃上清。
5.  加入75%乙醇(DEPC水配制)，轻轻洗涤沉淀（一次）。4°C，7500gⅹ5min弃上清。
6.  晾干，加入20ulDEPC H2O溶解（65°C促溶10~15min），分装入0.5ml离心管。（用干净的塑料手套套住离心管，37°C烘干）
三．  总RNA定量
1.  将分装好的离心管任取1管，（每管10ul，分别加入ddH2O 390ul），稀释40倍。测定
2.  在分光光度计上测浓度：RNA（mg/ml）=40ⅹOD260读数ⅹ450/1000