石蜡组织DNA的提取方法

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哺乳动物DNA的分离通常是在有EDTA及SDS一类的去污剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA，其大小（100—150kb）适用于Southern分析和用λ噬菌体构建基因组DNA文库。石蜡块切片10um/片×10，放入5ml离心管↓加1ml二甲苯，37℃，5′（脱蜡）4000rpm×15′↓小心吸去二甲苯↓重复上述步骤3次↓加入无水乙醇1ml，静置5′↓4000rpm×15′吸去乙醇↓重复一次↓自然干燥↓加1mlPBS↓加入1ml DNA 抽提液↓37℃，1小时（200ug/ml）蛋白酶10-15ul↓55℃，水浴，过夜加入0.1 M Tris 平衡液（pH 8.0）2ml↓12000rpm×15′吸上清，加入酚/氯仿（1：1）混合液2ml（氯仿为24：1的氯仿/异戊醇）↓12000rpm×15′吸上清，加氯仿2ml↓12000rpm×15′3M 醋酸钠150ul，-20℃预冷无水乙醇3ml，颠倒数次↓离心，弃上清↓抽干↓100ul去离子水稀释，-20℃保存试剂配制：1. DNA抽提缓冲液配方10 mM Tris•Cl (pH 8.0)0.1M EDTA (pH 8.0)配好灭菌后加RNase 至 20ug/ml0.5% SDS