基因转染（脂质体法）

yujian623

一、 试剂
1、 LipofectinTM；
2、 BRL829SA（-4℃保存）最适-MEMR1；
3、 GIBCO 320-1985 BD；
4、 DMEM 加20%FCS。
二、 操作过程：
在转染前18～24小时，将5×105 CV1细胞培养于直径10cm的平皿上
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准备转染试剂：
（1）DNA溶液：CAT质粒 3μgβ-半乳糖质粒 13μgddH2O加至 50μl
（2）基因转染 Lipofectin 溶液（BRL）：LipofectinTM（1mg/ml）30μl；ddH2O加至 20μl
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轻轻地混合（1）+（2），不要旋转
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用DMEM（无血清）培基洗细胞2次，以除去血清
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加入5ml最适-MEM1（GIBCO 320-1985 BD DMEM 可替代）
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加入（1）+（2））混合物到细胞中
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混合旋转
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37℃ 5%CO2孵箱中培养18小时
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加入5ml DMEM/20% FCS
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5%CO2孵箱中，37℃培养48小时
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CAT分析，鉴定。