酶切方法

yujian623

一、 小量酶解反应
（一）主要用于质粒的酶切鉴定。
典型的酶切反应体系如下：
质粒DNA 10μl10×缓冲液 2μl
限制酶 1μl
双蒸去离子水 7μl
总体积 20μl
（二）操作方法按下列顺序加入试剂：
在灭菌的新的Ep管中加入7μl双蒸水
↓
加入10×缓冲液2μl
↓
加入质粒DNA样本10μl
↓
最后加限制酶1μl（操作应迅速，用后立即放回低温冰箱）
↓
稍离心，混合
↓
置37℃水浴1～1.5小时（须将管盖盖严，避免水蒸气进入管内）
↓
取出后，电泳分析鉴定是否酶解。
二、 大量酶解反应主要用于大剂量制备基因片段。
一般反应体积在50～100μl，DNA用量在10～30μg，如设计100μl的反应体系，在新的Ep管中依次加入下列试剂：
10×缓冲液 10μl限制酶 2μl（20u）
质粒DNA样本 15μl最后加入双蒸水，补足反应总体积100μl
↓
置37℃水浴1～1.5小时
↓
取5μl电泳鉴定酶解效果。（如酶解不完全，可继续水浴，或加适量限制酶。）