转化子DNA的快速鉴定

yujian623

目的

1、选择性培养基上的转化子为材料检测重组质粒DNA分子的大小，选出合理的重组的转化体菌株。
2、掌握快速细胞破碎法，测定大小不等的质粒DNA。
原理

利用Cracking gel缓冲液，采用快速细胞破碎法直接从菌体中提取DNA

操作

（一）制备0.8%琼脂糖凝胶(30 ml)

（二）取Eppendorf管，每管加30μl Cracking gel缓冲液

（三）每扁头牙签，将菌落刮到Eppendorf管中

（四）在37℃水浴中保温15分钟

（五）取出各管，40℃，12,000 rpm/min，离心15分钟

（六）立即吸出各管上清液15μl，进行点样电泳

（七）当溴酚兰迁移到凝胶板的2/3处时，停止电泳。

（八）将电泳凝胶染色30分钟

观察质粒的迁移距离，并拍照供进一步分析。