直接凝集反应

yujian623

一、玻片凝集试验
（一）血型鉴定
目的  掌握玻片凝集反应的原理和应用；熟悉ABO血型的鉴定方法。
原理  将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。
材料  1、标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）
2、酒精棉球、采血针、生理盐水、试管、滴管、载玻片、蜡笔。

方法  1、酒精棉球消毒耳垂或手指末端后，用采血针刺破皮肤，取1—2滴血放入盛有0.5ml
生理盐水的试管中，混匀制成红细胞悬液。
2、取载玻片一张，用蜡笔划分为两格，分别注明A和B，并在相应部位各加一滴标准抗A和抗B单抗。
3、用滴管取红细胞悬液于抗A、抗B单抗中各加一滴。手持玻片，前后左右轻轻转动，促其充分混匀。
结果观察：
如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀混浊状，则为不凝集。
如肉眼观察难于判定是否凝集，可在显微镜下用低倍镜观察予以确认。

（二）菌种鉴定            
目的  观察细菌在玻片上与其相应抗体结合所出现的细菌凝集现象，理解抗原抗体反应的特异性。
原理  将已知细菌抗体与待测细菌混合，如果抗原与抗体相对应，则引起细菌凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断细菌种类。
材料  1、 1：20痢疾杆菌免疫血清，1：20伤寒杆菌免疫血清。
    2、 痢疾杆菌培养物。
    3、 生理盐水、玻片、记号笔、接种环、酒精灯、消毒缸等。

方法  1、 取洁净玻片1张，用记号笔划分三等份，如下图所示：
2、 用接种环分别取生理盐水、1：20伤寒杆菌免疫血清、1：20痢疾杆菌免疫血清各3-4环按图示位置放在玻片上，注意在换取另一种血清时要烧灼接种环，以免混淆血清产生错误结果。
3、 用接种环挑取少量痢疾杆菌加入玻片的生理盐水中，充分混匀，再挑取少量痢疾杆菌加人1:20伤寒免疫血清中混匀，同法挑取痢疾杆菌加入1：20痢疾杆菌免疫血清中，混匀。注意无菌操作。
4、 轻摇动玻片，1—2分钟后观察
结果观察
阳性：液体变清，并有乳白色凝集块出现。
阴性：液体仍然混浊，，无凝集块出现。
记录结果之后，将玻片放入含消毒液的指定容器内，切勿任意放置或冲洗。

注意  取细菌培养物时不宜过多，与免疫血清混合时，必须将细菌涂散、涂均匀，但不宜将面积涂得过大，以免很快干涸而影响结果观察。
  
二、试管凝集反应——血型抗体效价滴定     
在与《医学微生物学》的综合性实验中做
目的 了解试管凝集反应方法；掌握凝集效价的判定及其意义。
材料 1.  A或B型试者血清、 生理盐水
2.  A或B型红细胞悬液
3. 小试管、试管架、吸管
4. 37℃恒温培养箱等。
方法   取7支小试管，标1—7号。按上表加样，将待检血清进行倍比稀释。在第1~7管内加入红细胞悬液各0.5 ml。（注意：加样顺序由后往前加） 充分混匀后，置37℃恒温箱30分钟后观察记录结果。

表1-2  试管凝集实验方法和结果举例

结果观察：
先观察生理盐水对照管（第7管），应不发生凝集，液体混浊，管底沉淀呈圆形，边缘整齐。此沉淀物为红细胞悬液静置时因重力作用自然下沉形成。然后自第6管开始依次观察管内液体的混浊程度及管底凝集块的大小。
血清对倍稀释方法：
用吸管将第1管的溶液连续吸吹三次，使其充分混匀后吸出0.5 ml移入第2管（先反复练习吸吹方法，待掌握操作方法后再进行正式试验），同法使充分混匀后吸出0.5 ml 移入第3管，如此作倍比稀释至第6管，从第6管吸0.5 ml弃去，第7管为不加血清对照。

【结果判定】

孔底凝块观察：

凝集效价（血清凝集滴度）的判定：
通常以能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（++）的血清最高稀释度为血清凝集效价。上表所示结果，血清效价为1：160