神经胶质细胞的制备和培养

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1）取新生一周内大鼠，碘酒、酒精浸泡消毒后快速断头；
2）用眼科剪和镊剪除皮肤和颅骨，分离皮肤和颅骨时用不同的器具，弯剪剪取部分大脑皮层至60mm培养皿，培养皿内提前放置D-Hanks溶液；
3）解剖镜下取出脑膜及血管，转移组织至另一盛有D-Hanks溶液的器皿，将组织剪碎为1mm3左右的小块，然后小心转移至带螺帽的离心管内；
4）0.125%胰酶消化15-30分钟，以含10%胎（小）牛血清的DMEM培养基终止消化，巴氏吸管吹打，100目筛网机械过滤，制备混合细胞悬液；
5）计数，调整细胞密度，根据需求按适当密度种植于培养瓶或皿内；
6）放置于含5%CO2的37℃恒温培养箱，2-3天后换液，去除死亡及未贴壁细胞，以后每3-4日换液一次；
7）约两周后当细胞基本铺满时可在培养液中加用二丁酸环腺苷（dBcAMP，0.25mmol/L），该物质被认为有促进细胞分化和抑制小胶质细胞生长等作用；
8）根据细胞生长状况对培养细胞进行传代，多数文献建议用传代3-5次的星形胶质细胞进行实验，但一般不在换液或传代的当天；
少突胶质细胞和小胶质细胞的培养尚需在星形胶质细胞培养基础上进一步纯化，具体可参阅McCarthy和Giulian等的方法。