利用RNA干扰技术鉴定参与HCV复制的宿主基因

aqi96

HCV复制高度依赖于宿主的细胞因素。鉴定这些宿主因素不但有助于理解HCV感染生物学，而且有助于发现治疗HCV的新靶点。为了鉴定对HCV RNA复制有重要意义的宿主基因，我们筛选了源于Huh7的EN5-3细胞中的近4000条人类基因的小干扰RNA库（siRNA），EN5-3细胞可将HCV亚基因组复制子停泊于1b-N株的NS3-NS5B区（没做过类似的试验，所以翻译可能有所出入，请高手指正）。在本筛选中我们鉴定了可能调节HCV复制的9条基因。使这些基因沉默可以导致HCV复制减少超过60%，而且细胞毒性降到最低。以这些siRNA敲除宿主基因表达在RNA水平得以证实，在某些情况下，可在蛋白水平证实。siRNA使宿主基因沉默程度与HCV的抑制性相关性良好。这些基因包括一种G蛋白偶联受体(TBXA2R)、一种膜蛋白(LTbeta)、一种接头蛋白(TRAF2)、两种转录因子（RelA和核因子κB2），两种蛋白激酶（MKK4和SNARK）和两种密切相关的转录蛋白(SLC12A4和SLC12A5)的编码基因。有趣的是，这些基因中有部分基因参与了肿瘤坏死因子/淋巴毒素的信号转导通路。结论：本研究结果可为明确HCV复制提供重要信息。此外，这些细胞的基因可以成为治疗HCV的一系列新靶点.